大家好，上次我們介紹了細(xì)胞培養(yǎng)需要的實(shí)驗(yàn)室條件和實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng)。這些知識(shí)和小技巧以及小細(xì)節(jié)都掌握了嗎？今天，小編帶大家學(xué)習(xí)細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作步驟和操作要領(lǐng)，助您細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)事半功倍。
細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存
細(xì)胞復(fù)蘇
將細(xì)胞從液氮中取出后，放到37℃水浴鍋中進(jìn)行快速解凍，邊解凍邊輕微搖晃。
確定凍存管中的細(xì)胞解凍完全后，放到水平離心機(jī)中離心，1000rpm離心2min。
小心吸掉上清，加入500μL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
一般情況下，T75培養(yǎng)瓶中加10mL的培養(yǎng)基，將細(xì)胞加入到已加培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使細(xì)胞均勻分布，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是否良好，并觀察細(xì)胞的增殖數(shù)量。細(xì)胞要生長(zhǎng)到一定密度再進(jìn)行凍存。
懸浮細(xì)胞不用消化，將細(xì)胞輕輕吹散，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。不同的細(xì)胞要用不同的力度，不然會(huì)損傷細(xì)胞。
貼壁細(xì)胞要進(jìn)行消化，消化完成后，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
培養(yǎng)基重懸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，凍存密度在5×106-1×107/mL之間。
按照比例加入10%的DMSO，小心重懸細(xì)胞，細(xì)胞和DMSO充分混勻。或直接用細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存。將細(xì)胞加入到凍存管中，每管1mL。
將凍存管放到凍存盒中進(jìn)行梯度降溫，最后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
懸浮細(xì)胞有的結(jié)團(tuán)生長(zhǎng)，需要經(jīng)常觀察細(xì)胞狀態(tài)。
每次傳代都要將細(xì)胞團(tuán)吹打成單個(gè)細(xì)胞，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
棄上清，重懸細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度取2×105-5×105個(gè)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞復(fù)蘇
小心吸掉上清，加入2mL PBS，晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，洗掉多余培養(yǎng)基。
加入2mL 胰酶，放到培養(yǎng)箱中消化1-2min，輕拍培養(yǎng)瓶見(jiàn)細(xì)胞像沙粒樣散落，立即加入2mL含血清培養(yǎng)基終止消化，并用移液器吹打細(xì)胞，使細(xì)胞單個(gè)散落。吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
棄上清，重懸細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度取2×105-5×105個(gè)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
半懸浮（半貼壁）細(xì)胞培養(yǎng)
半懸浮細(xì)胞就是不完全貼壁，上清中也有細(xì)胞。
需要將上清收集到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。
重復(fù)貼壁細(xì)胞的操作，然后將上清中的細(xì)胞和消化下來(lái)的細(xì)胞重懸到一起再進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
索萊寶相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào) |
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1.8ml凍存管 |
YA0901 |
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100孔塑料凍存盒 （適用于1.8-2ml凍存管） |
YA0460 |
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優(yōu)級(jí)胎牛血清 |
S9020 |
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10×PBS緩沖液 |
P1022 |
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RPMI Medium 1640（含雙抗） |
31800 |
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DMEM（低糖，含雙抗） |
31600 |
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DMEM無(wú)糖培養(yǎng)基 |
90113 |
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胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚紅 |
T1300 |
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胰蛋白酶消化液(0.25%) 不含EDTA和酚紅 |
T1350 |
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二甲基亞砜 DMSO (細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)) |
D8371 |
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通用細(xì)胞凍存液 |
24800 |
