Pfu DNA Polymerase 500U/1000U/10KU
- 發(fā)布日期： 2019-06-14
- 更新日期： 2025-09-11
產(chǎn)品詳請(qǐng)
| 產(chǎn)地 |
中國(guó)
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| 品牌 |
solarbio
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| 貨號(hào) |
PC1300
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| 保存條件 |
RT
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| 英文名稱 |
Pfu DNA Polymerase
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| CAS編號(hào) |
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| 保質(zhì)期 |
3年
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| 別名 | Pfu DNA 聚合酶 |
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| 英文名稱 | Pfu DNA Polymerase |
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| 儲(chǔ)存條件 | -20 |
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| 外觀（性狀） | 液體 |
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| 單位 | 支 |
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本公司生產(chǎn)的Pfu DNA Ploymerase是從克隆有Pyrococcusfuriosis DNA Ploymerase基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過(guò)柱純化分離出來(lái)的重組蛋白，其分子量為90kDa。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正DNA擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)配，而傳統(tǒng)的Taq酶卻不能，其它耐熱DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等雖具有校正功能，但Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase中出錯(cuò)率*的。Pfu酶無(wú)5’→3’核酸外切酶活性，PCR反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/分鐘，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時(shí)仍保持90%以上的活性，對(duì)于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu酶的PCR產(chǎn)物為平末端，可加A處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。一般用于DNA的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析(SNP)和末端補(bǔ)平等。
Pfu來(lái)源：表達(dá)Pfu DNA聚合酶的大腸桿菌。
Pfu酶儲(chǔ)存緩沖液：50mMTris-HCl，pH 8.2；0.1mM EDTA；1mM DTT；0.1% Nonidet P40；0.1% Tween 20；50% 甘油。
Pfu單位定義：在74℃條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmmoldNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量為一個(gè)單位。
Pfu用途：1）常規(guī)PCR反應(yīng)中的DNA高保真體外擴(kuò)增；
2）基因定點(diǎn)突變和拼接。
Pfu注意事項(xiàng)：
1、 酶濃度：建議在50ml的體系中使用1.25個(gè)單位的Pfu DNA聚合酶，因?yàn)槊复嬖?’-5’外切酶活性，高濃度的酶可能會(huì)增加降解引物的可能性。*在加完dNTP后再添加Pfu DNA聚合酶。并在有冰浴的條件下混合PCR反應(yīng)中的各種成分。
2、延伸時(shí)間：Pfu DNA聚合酶的延伸速率低于Taq DNA聚合酶，大約為一分鐘600個(gè)堿基（Taq DNA聚合酶大約為一分鐘2000個(gè)堿基），因此建議擴(kuò)增1Kb的DNA用兩分鐘的延伸時(shí)間。對(duì)于大多數(shù)的反應(yīng)而言，25～35個(gè)擴(kuò)增循環(huán)就足夠了。
Pfu保存：-20℃保存至少一年。
