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| 產(chǎn)地 | 中國(guó) |
| 品牌 | solarbio |
| 貨號(hào) | P2250 |
| 用途 | 細(xì)胞分離 |
| 英文名稱 | |
| 包裝規(guī)格 | 200ml/kit |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
| 商品貨號(hào)： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價(jià)： | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| P2250-200ml/KIT | Solarbio | 200ml/KIT | 800.00元 |
保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期2年。無(wú)菌開封后，保存于室溫。
試劑盒組成：
試劑A 200mL
試劑C 100mL
細(xì)胞洗滌液 200mL
全血及組織稀釋液 200mL
紅細(xì)胞裂解液 100mL
操作步驟：
1. 制備臟器組織的單細(xì)胞懸液。
2. 細(xì)胞懸液體積小于5mL時(shí)，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊加于試劑A之上，形成梯度界面（細(xì)胞懸液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果），將細(xì)胞懸液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）
3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（細(xì)胞懸液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，*的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速*不超過(guò)1200g）。
4. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)胞為單個(gè)核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層，如圖所示（個(gè)體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。
5. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液）。
6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。
7. 重復(fù)步驟6
8. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。
臟器組織單細(xì)胞懸液的制備方法
臟器組織研磨的方法：
1. 無(wú)菌條件下摘取臟器組織，撕去臟器被膜，用眼科剪將臟器組織剪成小塊。
2. 將尼龍篩網(wǎng)或者是細(xì)胞過(guò)濾篩放置于平皿上，加入少量全血及組織稀釋液（保證臟器組織及獲得的細(xì)胞處于液體環(huán)境中）。
將臟器組織放置于篩網(wǎng)上，使用注射器活塞或者是無(wú)菌鑷子來(lái)研磨臟器組織（盡量控制研磨力
1. 度，保持篩網(wǎng)懸空，避免在皿底上直接研磨而造成大批細(xì)胞死亡）
2. 研磨完全后使用全血及組織稀釋液沖洗篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液，再經(jīng)濾網(wǎng)過(guò)濾。
注：
A. 可用酶消化法，使用膠原酶對(duì)臟器組織組織進(jìn)行消化，得到單細(xì)胞懸液。
B. 如果最終得到的細(xì)胞需要培養(yǎng)，那全過(guò)程所需試劑與器材均要求無(wú)菌。
C. 根據(jù)臟器組織的體積控制單細(xì)胞懸液的濃度在108~109個(gè)/mL。
注意事項(xiàng)：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。
D. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
E. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作， 避免微生物污染。
F. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
參考文獻(xiàn)
1. Boyum A . Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.
2. Ting A , Morris PJ . A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.
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5. Recalde HR . A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.
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7. Harris R , Ukaejiofo EO . Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.
相關(guān)產(chǎn)品：
R1018 細(xì)胞洗滌液
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