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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1135 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | NAD-malic enzyme (NAD-ME) activity detection kit |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：840
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：NAD-蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NAD-ME活性檢測|試劑盒
簡要介紹：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙tong酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前吸取 10mL 提取液加入充分溶解備用； 試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；用時每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：粉劑×1 支，-20℃保存；用時每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液：在 7.5mL 試劑二中加入 1mL 試劑三和 0.5mL 試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物 ME 活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NAD-ME 催化 NAD+還原成 NADH，在 340nm 下測定 NADH 增加速率。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板 和蒸餾水
操作步驟：
粗酶液提?。?/span>
細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）。8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。
血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
將試劑一在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）中保溫 15min 左右。 3、操作表：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 |
| 試劑一 | 200 |
| 工作液 | 90 |
| 樣本 | 10 |
將上述試劑按順序加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中混勻，在 37℃（哺乳動物）或 25℃ （其它物種），340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 5min 后的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。
實(shí)驗時，樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一 37℃或 25℃水浴放置。 3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水， 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。用 96 孔板做時盡量保持反應(yīng)溫度在 37℃或 25℃。
4、*兩個人同時做此實(shí)驗，一個人比色，一個人計時，以保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。用96 孔板做 時盡量做到樣本反應(yīng)時間一致。
5、如果ΔA＜0.01，可將反應(yīng)時間延長到 10 分鐘。
NAD-ME 活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
組織中 NAD-ME 活力的計算:
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=965×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =965×ΔA÷W
細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-ME 活力的計算:
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=965×ΔA÷Cpr
按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單 位。
NAD-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=1.93×ΔA
血清中 NAD-ME 活力的計算:
單位的定義：每 mL 血清在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =965×ΔA V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10 -4 L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：比色皿 光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
用 96 孔板測定的計算公式：
將上述公式中的 d-96 孔板光徑改為 0.9cm 進(jìn)行計算。
