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| 產地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC0635 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | NADH oxidase (NOX) activity detection kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質期 | 1年 |
| 是否進口 |
產品規(guī)格：100管/48樣 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1100
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵字：NADH氧化酶試劑盒|活性檢測試劑盒| NOX活性檢測|試劑盒|微量法
簡要介紹：
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應密切相關。NOX能夠將NADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP，在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。
產品詳細描述
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價： | 選擇規(guī)格 |
| BC0635-100管/48樣 | Solarbio | 100管/48樣 | 1100.00元 |  |
產品內容
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 1mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑四：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑六：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 4.5mL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。
產品說明
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可在氧氣存在下，直接將 NADH 氧化為 NAD。該酶不僅參與 NAD 的再生，而且與免疫反應密切相關。 NOX 能夠將 NADH 氧化為 NAD，NADH 的氧化與 2,6 二氯酚靛藍（DCPIP）的還原相偶聯(lián)， 藍色的 DCPIP 被還原為無色的 DCPIP，在 600nm 下測定藍色 DCPIP 的還原速率計算出 NADH 氧化 酶活性的大小。
自備儀器和試劑 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰、蒸餾水
操作步驟
一、樣品測定的準備：
1、 組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
2、 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽 勻漿。
3、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。
4、 將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
5、 將上清液轉移至另一 EP 管中，用于線粒體中泄露 NOX 活性測定。
6、 沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，用于 NOX 活性測定。
7、 NOX 總酶活即為上清中 NOX 活性與沉淀中 NOX 活性之和。
二、測定步驟和加樣表：
1、可見分光光度計預熱 30min 以上；
2、試劑四 37℃保溫放置。
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
| 試劑四 | 175 | 175 |
| 試劑五 | 25 | 25 |
| 樣本 | 10 | 10 |
| 蒸餾水 | 40 | |
| 試劑六 | 40 |
將上述試劑按順序在 1mL 玻璃比色皿中操作，加入試劑六后立即混勻，同時開始計時，在 600nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1，迅速將比色皿連同反應液一起放入 37℃水浴中，準確反應 1 分鐘。迅速取出比色皿并擦干，記錄 1 分 20 秒時的吸光度 A2。計算 ΔA=A1-A2，記錄 A 測定、A 對照，ΔA1=ΔA 上清測定-ΔA 上清對照，ΔA2=ΔA 沉淀測定-ΔA 沉淀對照。
三、NOX 活力單位的計算：
（一）用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下
A、上清中 NOX 活力的計算:
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=2525×ΔA1÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=5.05×ΔA1 V 反總：反應總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 提取：加入提取液體積，1.01mL； Cpr 上清：上清中蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細菌或細胞總數，500 萬。
B、沉淀中 NOX 活力的計算:
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=505×ΔA2÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=1.01×ΔA2 V 反總：反應總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：沉淀重懸體積，0.202mL； Cpr 沉淀：沉淀重懸后蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細菌或細胞總數，500 萬。
C、樣本 NOX 總活力的計算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計算： NOX（U/g 鮮重）=2525×ΔA1÷W+505×ΔA2÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： NOX（U/mg prot）=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2
（二）用 96 孔板測定的計算公式如下
A、上清中 NOX 活力的計算:
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=5000×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)=5050×ΔA1÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)=5000×ΔA1÷Cpr 上清
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA1÷0.01×V 反總÷(500÷V 提取×V 樣本)=10.10×ΔA1 V 反總：反應總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 提取：加入提取液體積，1.01mL； Cpr 上清：上清中蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細菌或細胞總數，500 萬。
B、沉淀中 NOX 活力的計算:
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/g 鮮重）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(W÷V 樣總×V 樣本)=1010×ΔA2÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/mg prot）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)=5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=ΔA2÷0.01×V 反總÷(500÷V 樣總×V 樣本)=2.02×ΔA2 V 反總：反應總體積，0.25mL；V 樣本：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：沉淀重懸體積，0.202mL； Cpr 沉淀：沉淀重懸后蛋白濃度，mg/mL；W，樣本鮮重，g；500，細菌或細胞總數，500 萬。
C、樣本 NOX 總活力的計算: 樣本 NOX 總活力即為上清中 NOX 活力與沉淀中 NOX 活力之和。
1、組織中 NOX 活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算： NOX（U/mg prot）=5000×ΔA1÷Cpr 上清+5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按樣本鮮重計算： NOX（U/g 鮮重）=5050×ΔA1÷W+1010×ΔA2÷W
2、細菌或培養(yǎng)細胞中 NOX 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算： NOX（U/mg prot）=5000×ΔA1÷Cpr 上清+5000×ΔA2÷Cpr 沉淀
（2）按細菌或細胞密度計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.005 定義為一個酶活力單位。 NOX（U/10 4 cell）=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2
注意事項：
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
2、比色皿中反應液的溫度*保持 37℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃蒸餾水，將此燒杯放入 37℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、*兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
4、實驗時，試劑六樣本在冰上放置，以免變性和失活。
5、因通過反應速率計算酶活，使用 96 孔板時請根據操作速度控制一次測定的樣本數量。
相關文獻：
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