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| 產地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1040 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | NAD-malate dehydrogenase (NAD-MDH) activity assay kit |
| CAS編號 | |
| 保質期 | 1年 |
產品規(guī)格：50管/48樣 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：360
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵字：NAD蘋果酸脫氫酶試劑盒|蘋果酸脫氫酶| NAD-MDH活性檢測|試劑盒
簡要介紹：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH 是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH 分為NAD-依賴的MDH 和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH 分布于細胞質和線粒體中。
產品詳細描述
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價： | 選擇規(guī)格 |
| BC1040-50管/48樣 | Solarbio | 50管/48樣 | 360.00元 |  |
產品內容：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 360μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 327μL 雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。
產品說明：
MDH（EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循 環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰 乙酸是重要的中間產物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細胞多種生理活動中扮演著重 要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同 的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH， 在真核細胞中，NAD-MDH 分布于細胞質和線粒體中。 NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的準備：
1、 細菌、細胞樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每 200 萬細菌或細胞加入 400μL 提取 液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），8000g4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
2、 組織：
稱取約 0.05g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。
3、 血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定步驟和加樣表：
紫外分光光度計提前預熱 30min，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零，試劑一 37℃預熱 15min。
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
| 樣本 | 20 | |
| 蒸餾水 | 20 | |
| 試劑一 | 760 | 760 |
| 試劑二 | 10 | 10 |
| 試劑三 | 10 | 10 |
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，充分吸打混勻后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸 光度 A1 和反應 1min 后的吸光度 A2，盡量保持反應溫度為 37℃。計算ΔA=A1-A2。記錄ΔA 測定、 ΔA 空白。
三、NAD-MDH 活力單位的計算：
1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（U/mL）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷V 樣本÷T =6430 ×(ΔA 測定-ΔA 空白)
2、組織中 NAD-MDH 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（U/mg prot）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(V 樣本×Cpr)÷T = 6430 ×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。 NAD-MDH（U/g 鮮重）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣本)÷T =6430×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷W
3 細菌或培養(yǎng)細胞中 NAD-MDH 活力的計算:
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（U/mg prot）=（ΔA 測定-ΔA 空白）÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣本×Cpr)÷T = 6430×(ΔA 測定-ΔA 空白) ÷Cpr
按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗 1nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（U/10 4 cell）=(ΔA 測定-ΔA 空白)÷(ε×d）×V 反總÷(500×V 樣本)÷T =13×(ΔA 測定-ΔA 空白) V 反總：反應總體積，0.8mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)， 6.22×10 -3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應時間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL； 500：細菌或細胞密度，10 4 /mL
注意事項：
1、粗酶液的提取必須在 0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
2、實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
3、當初始讀值小于 0.7 或者ΔA 大于 0.5 時建議稀釋后測量。
4、建議一人加樣一人比色。
5、空白管測 1-2 管即可。
