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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC2210 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) activity assay kit |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：7200
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GAPDH活性檢測|試劑盒
簡要介紹：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機(jī)磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液一：25mL×1 瓶，4℃保存；
提取液二：25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體14μL×1 支，4℃保存；
產(chǎn)品說明：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)，在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、無機(jī)磷和NAD，340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
需自備的儀器和用品
分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
組織樣品的前處理
（1）總GAPDH酶提取：建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），然后8000g 4℃離心10min，取上清測定。
（2）胞漿和葉綠體GAPDH酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液一），冰浴勻漿后于4℃ ，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃8000g離心10min，取上清用于測定胞漿GAPDH酶的活性。取沉淀加入1ml提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），然后4℃8000g離心10min，取上清測定葉綠體GAPDH酶的活性。
建議測定總GAPDH酶活性，按照步驟（1）提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和線粒體中的GAPDH，則按照步驟（2）提取粗酶液。
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提取液一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定
（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（2）在試劑三中加入500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（3）在1mL 石英比色皿中加入30μL 樣本、20μL 試劑三和950μL 工作液，混勻，加入*一個試劑的同時開始計時，記錄340nm 處20s 時的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
三、GAPDH 活性計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T
=1072×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T
=1072×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。
GAPDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T
=2.14×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
