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亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱(chēng)：Leucine aminopeptidase (LAP) activity assay kit
關(guān)鍵詞：亮氨酸氨基肽酶|亮氨酸氨基肽酶活性檢測(cè)|LAP|LAP活性檢測(cè)
貨號(hào)：BC4140
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存；臨用前加入5mL丙tong溶解。
產(chǎn)品說(shuō)明：
LAP是一種膜結(jié)合酶，廣泛存在于肝、膽、胰等組織中，參與組織蛋白和某些肽類(lèi)的降解更新。
各類(lèi)肝病患者因肝細(xì)胞損傷，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作為各類(lèi)肝病的一項(xiàng)初步檢測(cè)指標(biāo)，特別是肝癌鑒別診斷的指標(biāo)。
LAP分解L-亮氨酸對(duì)硝基ben胺生成對(duì)硝基ben胺，后者在405nm有*吸收峰，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算LAP活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、丙tong、勻漿器/研缽。
操作步驟：
一、樣本處理：
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心10min。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3 秒，間隔7 秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。液體：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，波長(zhǎng)調(diào)至405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表：在1mL玻璃比色皿中分別加入下列試劑

三、酶活計(jì)算公式
1、血清（漿）LAP 活力的計(jì)算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1nmol的對(duì)硝基ben胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（U/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷V樣÷T=675.4×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol對(duì)硝基ben胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(V樣×Cpr) ÷T=675.4×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1nmol對(duì)硝基ben胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（U /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=675.4×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol對(duì)硝基ben胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（U /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.35×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；
ε：對(duì)硝基ben胺摩爾消光系數(shù)，9.87×103 L / mol /cm；
109：1mol=109nmol ；
d： 比色皿光徑，1cm；
V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；
V 樣總：加入試劑一體積，1 mL；
T：反應(yīng)時(shí)間，3 min；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需單獨(dú)測(cè)定；
W：樣本質(zhì)量，g；
500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
注意事項(xiàng)：
1、△A大于0.5時(shí)或者A值大于1.5時(shí)建議將樣品上清用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
2、空白管的△A變化小于0.01。