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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC2115 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Vitamin B6 (VB6) content detection kit |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
維生素 B6 檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
英文名稱：Vitamin B6 (VB6) content detection kit
關(guān)鍵詞：維生素B6|維生素B6檢測|維生素B6含量檢測
貨號：BC2115
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加入 10mL 蒸餾水混勻，如果一次性用不完，可分 裝于-20℃保存待用。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 維生素 B6，4℃保存。臨用前加入 1mL 試劑一，配成 10mg/mL（即 10000μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
維生素 B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形 式存在，是一種水溶性維生素，肉類、全谷類、蔬菜和堅果類中含量較高。在機(jī)體中參與多種蛋白 質(zhì)和氨基酸的代謝，對生物體具有極其重要的作用。 VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在 400nm 有特征吸收峰。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研 缽/勻漿器、EP 管、冰和蒸餾水。
操作步驟：
粗酶液提?。?/span>
組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加 入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定（動物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復(fù)離心 2-3 次至 上清無混濁）。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加 入 0.6mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；加蒸 餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定。 液體：直接檢測。
測定步驟：
分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。
將 10mg/mL（10000μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋為 500、250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
操作表：
在 1.5ml 離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑
樣品對照管 樣品測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管 空白對照管
樣品（μL） 40 40 - - -
試劑一（μL） - - - 40 40
標(biāo)準(zhǔn)溶液 （μg/mL） - - 40 - -
試劑二（μL） 40 40 40 40 40
試劑三（μL） 60 60 60 60 60
試劑四（μL） - 60 60 60 -
蒸餾水（μL） 60 - - - 60
充分混勻，25℃反應(yīng) 20min，測定 400nm 處吸光值，記為 A 樣品測定管和 A 樣品對照管、 A 空白管、A 空白對照管，△A=（A 樣本測定管-A 樣本對照管） （A 空白管- A 空白對照管）。 空白管、空白對照管只要做一管。
維生素 B6 含量計算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μg/mL）
維生素 B6 含量的計算：
按蛋白濃度計算 VB6（μg/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Crp）= x÷Cpr
按樣本質(zhì)量計算 VB6（μg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W
按照細(xì)胞數(shù)量計算 VB6（μg/104 cell）= x×V 提取÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）=x÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）
按液體體積計算 VB6（μg/mL）= x×V 提取÷V 提取= x
V 提?。禾崛∫后w積，1mL；
V 樣：加入的樣品體積，0.04mL；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
A 大于 1.2 時，建議將樣品用試劑一稀釋后再進(jìn)行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
蛋白濃度較高的樣品，比如動物組織、豆類種子等，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后 再測定，在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 顯色完成后立即進(jìn)行測定，盡量保證反應(yīng)時間一致。
