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原果膠含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
英文名稱：Original pectin content test kit
關(guān)鍵詞：原果膠含量|原果膠|原果膠含量檢測(cè)|原果膠含量測(cè)定
貨號(hào)：BC3685
規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液一：液體 110mL×2 瓶，4℃保存。
提取液二：液體 120mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：濃硫酸 25mL，自備。
試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。臨用前加入 0.943mL 提取液二，配成 50μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液

產(chǎn)品說(shuō)明：
果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，不溶性果膠為原果膠。
原果膠是不溶于水的物質(zhì)，但可在酸、堿、鹽等化學(xué)試劑及酶的作用下，加水分解轉(zhuǎn)變成水溶性果膠，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。
原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔zuo縮合生成紫紅色化合物，在 530 nm 處有特征吸收峰。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、濃硫酸、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器和蒸餾水。

操作步驟：
一、原果膠的提?。?/span>
將組織樣品搗碎，按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為 1: 20 的比列（建議取約 0.05g 樣品，加入 1mL 提取液一），置于 90℃恒溫水浴鍋中浸提 30min，取出冷卻后于 5000g、25℃離心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重復(fù)操作一次，離心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒溫水浴鍋中水解 1h，取出冷卻后于 8000g、25℃離心 15min，取上清液待測(cè)。

二、測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 530nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 50μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用提取液二稀釋為 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：
試劑名稱     空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 對(duì)照管 測(cè)定管
樣本（μL）     -      -      25     25
標(biāo)準(zhǔn)品（μL）   -     25       -      -
蒸餾水（μL）  25     -        -      -
試劑一（μL）  200   200     200    200
混勻、90℃放置 10min，取出后冷卻
試劑二（μL）    -     -       25    -
試劑三（μL）   25    25       -    25
混勻，25℃靜置 30min 后吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，測(cè)定
530nm 處吸光值，分別記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 對(duì)照管和 A 測(cè)定管?！?/span>A 標(biāo)
準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，△A 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

三、原果膠含量的計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 測(cè)定帶入方程得到 x（μmol/mL）
2、 原果膠含量的計(jì)算：
原果膠含量(μmol /g 鮮重)= x×V 提取液二÷W =x÷W
V 提取液二：加入提取液二的體積，1mL；
W：樣本鮮重，g。

注意事項(xiàng)：
1、 濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，90℃加熱、冷卻后再打開(kāi)蓋子，以防液體飛濺燒傷。
2、 若吸光值超過(guò) 1，可將樣本提取液二進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。