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非蛋白巰基測定試劑盒說明書
 微量法 100T/48S

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Non-protein thiol content detection kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：260
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：非蛋白質(zhì)巰基|非蛋白質(zhì)巰基檢測|非蛋白質(zhì)巰基測定

測定意義：
生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

測定原理：
巰基基團(tuán)與 5,5’-二硫代-雙-硝基ben甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有*吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品：
天平、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

試劑組成和配制：
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 1 mL×1 管，4℃避光保存。

樣品的制備：
1. 動(dòng)物、植物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后加入 4mL 甲醇，室溫震蕩 10min，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
3. 血清、培養(yǎng)液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室溫震蕩 10min，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

操作步驟：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、操作表
對照管 測定管
樣品（μL） 40 40
試劑一（μL） 150 150
試劑二（μL） 10
H2O（μL） 10
混勻，25℃靜置，于微量石英比色皿/96 孔板，測定 412nm 吸光值。ΔA=A 測定-A 對照。

計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.7236 x，R2 = 0.9994
1. 組織：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/g）=1.7236A×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×W) ×5=14.5×ΔA÷W
2. 血清、培養(yǎng)液：
非蛋白質(zhì)巰基巰基含量（μmol/mL）=1.7236A×V 反總÷V 樣×5×103=14500×ΔA
3. 細(xì)胞：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/104）=1.7236A×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ×5=14.5×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣品質(zhì)量，g ；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
103 ：1mmol/L=103μmol/ L
b.用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8618x，R2 = 0.9994

1. 組織：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/g）=
0.8618A×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）×5= 29×ΔA÷W

2. 血清、培養(yǎng)液：
非蛋白質(zhì)基含量（μmol/L）=
0.8618A×V 反總÷V 樣×5×103=29000×ΔA
3. 細(xì)胞：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/104）=0.8618A×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ×5=14.5×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；
V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣品質(zhì)量，g ；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L

注意事項(xiàng)
*檢出限為 10μ mol/L