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非蛋白巰基測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Non-protein thiol content detection kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：150
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：非蛋白質(zhì)巰基|非蛋白質(zhì)巰基檢測|非蛋白質(zhì)巰基測定
測定意義
生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

測定原理
巰基基團(tuán)與 5,5’- 二硫代-雙-硝基ben甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有*吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水，甲醇。

試劑組成和配制
提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備
1. 動(dòng)物、植物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后加入 4mL 甲醇，室溫震蕩 10min，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
3. 血清、培養(yǎng)液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室溫震蕩 10min，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

操作步驟
對照管      測定管
樣品（μL）     200         200
試劑一（μL）   750         750
試劑二（μL）                50
H2O（μL）      50
混勻，25℃靜置 10min， 1cm 光徑玻璃比色皿，雙蒸水調(diào)零，測定 412nm 吸光值，ΔA=A 測定-A對照。
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.7236 x，R2 = 0.9994
1. 組織：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/g）=1.7236A×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×W) ×5=14.5×ΔA÷W
2. 血清、培養(yǎng)液：
非蛋白質(zhì)巰基巰基含量（μmol/L）=1.7236A×V 反總÷V 樣×5×103=14500×ΔA
3. 細(xì)胞：
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/104）=1.7236A×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ×5=14.5×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；
V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；
V 樣總：加入提取液體積，1mL；
W：樣品質(zhì)量，g；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L

注意事項(xiàng)
*檢出限為 10μ mol/L。