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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC0655 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Single dehydroascorbate reductase (MDHAR) detection kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進口 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1900
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：單脫氫抗壞血酸還原酶|抗壞血酸還原酶|MDHAR活性檢測|試劑盒|微量法
測定意義：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
測定原理：
MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+沒有。通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算出MDHAR活性。
需要的儀器，耗材:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 2 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加入 2.5 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四：液體×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 試劑一充分溶解。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1：5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10 4個）：提取液體積（mL）為 500-1000：1 的比例（建議 500 萬 細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲超聲破碎細胞（功率 300w，超聲 3s，間隔 7s，總時間 3min）； 然后 10000rpm，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
二、MDHAR 測定操作：
1. 分光光度計預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在 25℃水浴鍋中預熱 30 min。
3. 依次在石英比色皿中加入下列試劑
| 試劑名稱(μL) | 試劑二 | 試劑三 | 試劑四 | 試劑一 | 蒸餾水 | 上清液 |
| 空白管 | 20 | 20 | 20 | 120 | 20 | |
| 測定管 | 20 |
迅速混勻后于 340nm 比色，記錄 30s 和 150s 的吸光值。分別記為 A1、A2，ΔA=A1-A2，得到 △A 測定、△A 空白。
三、MDHAR 活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣）÷T =0.804×(△A 測定-△A 空白)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮重) =[(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4個細胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106]÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷細胞數(shù)量 ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6220L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反 總：反應體系總體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V 樣總： 提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測定，建議使用本公司 蛋白質(zhì)含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；T：反應時間，2min；細胞數(shù)量：萬個。
b.使用 96 孔板測定的計算公式如下：
（1）按蛋白濃度計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣）÷T =1.340×(△A 測定-△A 空白) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮重)=[(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =1.340×(△A 測定-△A 空白) ÷W
(3)按細胞數(shù)量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4個細胞每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106]÷（細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =1.340×(△A 測定管-△A 空白管) ÷細胞數(shù)量
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反總：反應體系總體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V 樣 總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測定，建議使用本 公司蛋白質(zhì)含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；T：反應時間，2min；細胞數(shù)量：萬個。
相關(guān)文獻：
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子:3.404 PMID:30099273
