|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC3290 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Binding starch synthase (GBSS) test kit |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價(jià)格：3000
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶檢測(cè)試劑盒|GBSS檢測(cè)試劑盒|結(jié)合態(tài)淀粉合成酶|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS 催化ADPG 與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙tong酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH 生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP 數(shù)量呈正比，通過340nm 下測(cè)定NADPH 的增加量，可以計(jì)算GBSS 活性。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每支加入7mL試劑一。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每支加入5mL試劑一。
試劑五：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每支加入8mL試劑一。
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入500μL雙蒸水，充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存；
試劑七：液體250μL×1支，-20℃保存；
試劑八：液體12.5μL×1瓶；每支臨用前加入溶解好的4mL試劑四
反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前在試劑二中加入7mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后加入試劑三混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測(cè)定。
產(chǎn)品說明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙tong酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
| 試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 |
| 樣本 | 200 |
| 試劑二 | 270 |
| 混勻，30℃保溫20 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻 | |
| 試劑三 | 150 |
| 混勻，30℃保溫30 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失）， 冰浴冷卻，10000g 常溫離心10min，取上清液 | |
| 上清液 | 450 |
| 試劑四 | 300 |
| 試劑五 | 15 |
| 試劑六 | 15 |
混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
三、GBSS活性計(jì)算
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS活性（U/mg prot）＝ΔA×（V反應(yīng)體系÷1mL）÷T÷ε÷d÷（Cpr×V樣本×V上清÷（V樣本+V試劑二+V試劑三））=432×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
