|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC1580 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Glutamate (Glu) content test kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存，臨用前加入 40mL 試劑一； 試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存，臨用前加入 2.5mL 試劑二； 標(biāo)準(zhǔn)品：液體 0.5mL×1 支，4℃保存。10μmol/mL 谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。
產(chǎn)品說(shuō)明：
Glu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一，而 且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外，Glu 還是味精的主 要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。 谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+，引起 340nm 處吸 光度的上升，通過(guò)測(cè)定 340nm 吸光度的變化，計(jì)算谷氨酸含量。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、谷氨酸提取 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì) 胞加入 1mL 試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 10000rpm， 常溫離心 10min，取上清待測(cè)。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000rpm，常溫離心 10min，取上清待測(cè)。
二、測(cè)定步驟 1、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。 2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 將標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為 2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 3、在 1mL 石英比色皿中加入下列試劑： （1）標(biāo)準(zhǔn)管：在 1mL 石英比色皿中加入 200μL 標(biāo)準(zhǔn)溶液、800μL 試劑三和 50μL 試劑四混勻， 立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值為 A1 和 5min20s 時(shí)的吸光值 A2，計(jì)算?A=A2-A1。 （2）測(cè)定管：在 1mL 石英比色皿中加入 200μL 樣本、800μL 試劑三和 50μL 試劑四混勻，立即 記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值為 A1 和 5min20s 時(shí)的吸光值 A2，計(jì)算?A=A2-A1。
三、谷氨酸含量計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以谷氨酸含量（μmol/mL）為 x 軸，標(biāo)準(zhǔn)管?A 為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b。將測(cè)定管?A 帶 入方程得到 x 值。
2、氨基酸含量計(jì)算： （1）按照蛋白濃度計(jì)算 谷氨酸含量（μmol/mgprot）=x×V 樣本÷（Cpr×V 樣本）=x÷Cpr。 （2）按照樣本鮮重計(jì)算 谷氨酸含量（μmol/g 鮮重）=x×V 樣本÷（W÷V 樣總×V 樣本）=x÷W。 （3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 谷氨酸含量（μmol/104 cell）＝x×V 樣本÷（500÷V 樣總×V 樣本）=0.002x。 V 樣總：加入提取液體積，1mL；V 樣本：加入的樣本體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； W：樣本鮮重，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000 萬(wàn)。
注意事項(xiàng)： 為提高檢測(cè)靈敏度，測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于 1 且?A 小于 0.4，若大于此值則需要將上清液用試 劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定。
相關(guān)文獻(xiàn)：
《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang，Chengzhen Liang，Zhigang Meng，Yanyan Li，Muhammad Ali Abid，Muhammad Askari，Peilin Wang，Yuan Wang，Guoqing Sun，Yongping Cai，Shou-Yi Chen，Yi Lin，Rui Zhang，Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影響因子:3.712 PMID:
