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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC0745 |
| 用途 | |
| 英文名稱 | Hexokinase (HK) kit |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進口 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1270
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字：己糖激酶試劑盒|活性檢測試劑盒|己糖激酶活性檢測|試劑盒|微量法
簡要介紹：
HK廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是葡萄糖分解過程中的第一個關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
產(chǎn)品詳細描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體20mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；
產(chǎn)品說明：
HK廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是葡萄糖分解過程中的第一個關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、研缽、冰。
操作步驟：
一、樣品測定的準備：
細菌或培養(yǎng)細胞：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作：
分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
樣本測定
（1）在試劑二中加入18mL 試劑一充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑4℃保存一周；
（2）在試劑三中加入1mL 試劑一，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一周；
（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入180μL 試劑二、10μL 試劑三和10μL 樣本，混勻，立即記錄340nm 處20s 時的吸光值A1，比色后迅速將比色皿或酶標板連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴或恒溫箱中，準確反應(yīng)5分鐘；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
1、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
2、*兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。
3、不同勻漿組織中HK 活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2 只預(yù)試，若ΔA>0.5，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液（計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），或縮短反應(yīng)時間至2min,使ΔA<0.5，以提高檢測靈敏度。
HK活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
血清（漿）HK 活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=643×ΔA
組織、細菌或細胞中HK 活性
按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.286×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；
V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
b.用96 孔板測定的計算公式如下
血清（漿）HK 活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=1071.7×ΔA
組織、細菌或細胞中HK 活性
按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1071.7×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1071.7×ΔA÷W
按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1 萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（U/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=2.143×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
相關(guān)文獻：
《Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance》 作者:Jing Li，Yabing Duan，Chuanhong Bian，Xiayan Pan，Chengjie Yao，Jianxin Wang，Mingguo Zhou 期刊:Pesticide Biochemistry and Physiology 影響因子:2.87 PMID:30744889
《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影響因子:1.984 PMID:30420897
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