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產(chǎn)品名稱:脯氨酸(PRO)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名: Micro Proline (PRO) Content Assay Kit

脯氨酸(PRO)含量檢測(cè)試劑盒

品牌：Solarbio | 貨號(hào)：BC0295

測(cè)定意義：Pro廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，逆境條件下，植物體內(nèi)Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應(yīng)生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測(cè)定吸光度。

需要的儀器，耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、冰乙酸25mL、甲苯50mL、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：冰乙酸4℃保存。（自備）
試劑二：液體35 mL×1瓶， 4℃保存。
試劑三：甲苯4℃保存。（自備）
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，脯氨酸10mg，4℃保存。

產(chǎn)品說明：
脯氨酸(Pro)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，逆境條件下，植物體內(nèi)Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標(biāo)之一。 
用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應(yīng)生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測(cè)定吸光度。
實(shí)驗(yàn)需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96孔板、冰乙酸、甲苯、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備 
1、細(xì)胞、細(xì)菌或組織樣品的制備 ： 
細(xì)菌或細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清；按照每100萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），之后置沸水浴振蕩提取10min；10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測(cè)。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；之后置沸水浴振蕩提取10min，10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：取100μL血清（漿）加入0.9mL提取液，充分混勻，之后置沸水浴振蕩提取10min，10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測(cè)。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的處理：稱取1mg，將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、10、8、6、4、2、1、0 μg/mL。

• 測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm，甲苯調(diào)零。
2、取0.5mL上清液（或稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品）+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中，置沸水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），每10min振蕩一次。
3、待冷卻后，在試管中加入1mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉(zhuǎn)至試劑三中；吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中，于520nm波長(zhǎng)處比色，記錄吸光值。
4、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值和濃度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

三、Pro含量計(jì)算：
1、通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品脯氨酸含量(y為脯氨酸含量，μg/mL；x為OD值)
2、按照細(xì)菌、細(xì)胞個(gè)數(shù)或者組織鮮重計(jì)算，首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值：
細(xì)胞或細(xì)菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)= y÷細(xì)胞濃度(10⁴ cell/mL)
Pro含量(μg/g mass) =y÷樣本鮮重(g/mL)
3、血清（漿）中脯氨酸含量，首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得y值：
Pro含量[μg/mL血清（漿）] = y÷0.1mL血清（漿）/mL
注意：提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測(cè)定。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,Yanyan Li,Peilin Wang,Yuan Wang,Guoqing Sun,Yongping Cai,Shou-Yi Chen,Yi Lin,Rui Zhang,Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影響因子:3.712 PMID:
《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影響因子:2.825 PMID:30055519
《Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense》 作者:Ying Zhao,Wengang Yu,Xiangyu Hu,Youhai Shi,Yu Liu,Yunfang Zhong,Peng Wang,Shuya Deng,Jun Niu,Xudong Yu 期刊:Gene 影響因子:2.638 PMID:29604462