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| 產(chǎn)地 | |
| 品牌 | 同仁 |
| 貨號 | CK04 |
| 保存條件 | 4℃避光 |
| 英文名稱 | CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒 |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年個月 |
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 規(guī)格 包裝
CK04Cell counting KIT-8 (CCK-8)原裝同仁
CK04Cell counting KIT-8 (CCK-8)原裝 同仁
保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品說明
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒，為MTT 法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒使用說明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時）
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5 個細(xì)胞濃度梯度，每組3-6 個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時間。）
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒二、細(xì)胞活性檢測
1、在96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
活力計(jì)算：.
細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
注意事項(xiàng)：
①建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時，貼壁細(xì)胞的小接種量至少為 1 ,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。
④如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 檢測靈敏度高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
CCK----8 法與其它檢測?法之間的mtt法較： 詳見說明書
相關(guān)產(chǎn)品：
M1020 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M，細(xì)胞培養(yǎng)級
H1020 Hanks，含鈣鎂，含酚紅（HBSS）
H2045 EBSS（不含鈣鎂，不含酚紅 ）
12100 DMEM(H)
S9000 特級胎牛血清
P1400 青鏈霉素混合液(100×)
