大家好，小編又又又來了。今天是WB最后一步了，抗體孵育到顯影過程。

01一抗孵育

◆ 封閉結(jié)束前20min準備和所需一抗數(shù)量相等的孵育盒，在孵育盒上用記號筆標注出抗體編號及所需稀釋比。按照規(guī)定的稀釋比例進行抗體稀釋。稀釋比例建議預實驗提前摸索或者根據(jù)抗體說明書上建議。

◆ 封閉時間結(jié)束之后，倒掉封閉液，將稀釋好的抗體加入到槽內(nèi)，將搖床放入4℃展示柜孵育過夜。

◆ 第二天將搖床搬出，平衡室溫搖15min，倒掉一抗工作液，加入5mL TBST潤洗膜一次，倒掉，加新的TBST洗膜5min，倒掉TBST，重復5次，此過程在搖床上進行。

02二抗孵育

◆ 在洗膜的過程中稀釋二抗，確定好一抗的物種來源，選擇相應的二抗進行稀釋，稀釋液為1xTBST。

◆ 洗膜結(jié)束，倒掉TBST，盡量使孵育盒內(nèi)無殘留液體。然后加入二抗稀釋液，孵育60min，此過程在搖床上進行。

◆ 二抗孵育60min后，加入5mL TBST洗膜，“SPEED”檔位調(diào)到50-60，洗膜5min，倒掉TBST，重復5次。

03顯影

按照膜的大小，配置ECL發(fā)光液體積，將發(fā)光液放在PE手套上，充分混勻。將膜從孵育盒中夾出，用紙沾干，放入發(fā)光液中5秒后用紙沾干，放入成像儀中曝光成像。

索萊寶相關產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱
P0012	10×麗春紅
SW3010	膜封閉液
A1800	抗體稀釋液
A1810	一抗稀釋液
A1820	HRP標記抗體稀釋液
A1830	AP標記抗體稀釋液
A1840	熒光抗體稀釋液
T1085	1×TBST
SW2010	Western blotting (小鼠IgG)ECL顯色試劑盒
SW2020	Western blotting (兔IgG)ECL顯色試劑盒
SW2030	Western blotting (山羊IgG)ECL顯色試劑盒
SW2040	Western blotting (小鼠/兔IgG) ECL顯色試劑盒

好了，關于WB實驗的小技巧和注意事項都講完了，大家對于WB是不是有了一些新的想法，索萊寶公司除了能夠提供相關試劑外，還提供技術服務呦，把您的蛋白或者細胞樣本交給我們，我們提供完整的實驗報告和所有原始曝光圖片，助力您高分文章的順利發(fā)表。

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