| 有效期 | 2年 |
|---|---|
| 儲存條件 | RT，避光，有效期2年 |
| 外觀（性狀） | 液體 |
| 單位 | 盒 |
產(chǎn)品組成：
名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
各種動物外周血淋巴細(xì)胞分離液 | 200ml | |
全血及組織稀釋液 | R1017 | 200ml |
細(xì)胞洗滌液 | R1018 | 200ml |
產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品是一種用于分離動物外周血淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據(jù)血 細(xì)胞的密度差異，通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細(xì)胞從外周血中分離出來。適用 于從動物抗凝血液中分離淋巴細(xì)胞，無菌條件下分離的淋巴細(xì)胞可用于培養(yǎng)。 本品僅供科研使用。
注意事項(xiàng)：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間，請?jiān)跓o菌條件下啟封，避免微生物污染。。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條 件下離心，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。
D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞 得率及純度。
E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁影響分離效果。
F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離 條件。
G. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加；吸取 過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。
H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染。
I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液 的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。
2. 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積 分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離 液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液 上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢⑿纬擅黠@的分 層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長，在離 心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）
3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min （血液的體積越大所需的離心力越大，離心 時(shí)間越長，最佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn) 速最大不超過1200g）。
4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的 血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層，離心管 底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。 5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心 管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層 細(xì)胞。250g，離心10min。
6. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。
7. 重復(fù)步驟6
8. 棄上清，細(xì)胞重懸備用
參考文獻(xiàn)
1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.
2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.
3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.
4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.
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